白癜风（Viuligo）是常见的局限性色素减退性皮肤病「1」「2」，由于病因复杂难以治愈。我们采用新疆维吾尔医治疗白癜风的一味草药——驱虫斑鸠菊，研制成注射液剂，经多年临床使用证明是治疗白癜风的较理想药物「3」「4」。我们自行设计并建立酪氨酸酶分析法，用以对驱虫斑鸠菊注射液的作用机理进行研究与探讨。
实 验 部 分
「仪器」UV-365分光光度计（日本本岛津）；低温高速离心机（吉林离心机厂）；组织捣碎机（上海医疗器械厂）
「仪器」DL-多巴（美国Sigma公司）；驱虫斑鸠菊注射液（安徽金太阳生化药业提供）；野生蘑菇（Agaricus SP.产于新疆博斯腾湖边的芦苇丛中）
「方法与结果」
一、酪氨酸酶的制备「5」
以野生蘑菇为原料，用盐析和透析的方法，提取制备酪氨酸酶。
二、酪氨酸酶的活力测定法
往盛有一定量磷酸缓冲液（PH7）的试管中分别加入0.5ml多巴水溶液(1.044mg/ml)和0.05ml酪氨酸酶溶液（总蛋白含量为1.79 mg/ ml）。37℃温育5分钟,立即用分光光度计在475nm处测定吸收率（A）。以每分钟A475增加0.001定为1个酶活力单位「6」。
本文所使用的酪氨酸酶溶液的活力单位控制在1200单位/毫升±10%。
三、各种药物对酪氨酸酶活性的影响
选用治疗白癜风的常用药物（补骨脂、白灵片、白灵酊、白疾黎、白芷和白癜净）；微量元素（铜和锶）；驱虫斑鸠菊注射液和生理盐水，观察各种药对酶活性的影响。为实验方便，将部分药物作如下处理：
1、分别将补骨脂、白灵片、白疾黎和白芷粉碎，用90%乙醇侵泡提取，提取液置水浴上挥尽乙醇，加入适量水，过滤，滤液备用。
2、往一定量的白灵酊和白癜净中加入适量水，在水浴上挥尽乙醇，过滤，滤液备用。
3、配制含铜离子20ppm的氯化铜水溶液和含锶离子200ppm氯化锶水溶液。
在酶促反应中分别加入以上各种药物，测定酶活力值，并且计算活力增加百分率。结果见表1，绘制药水物对酪氨活性的影响曲线（图1）。
四、药物提高酪氨酸酶活性的动力学观察
选用对酪氨酸酶活性有提高作用的驱虫斑鸠菊注射液、补骨脂、白灵酊和铜离子水溶液。按酶活力测定方法操作，试剂用量与结果见表2。以吸收率的倒数（1/A）对底物浓度的倒数（1/S）作Linewaver--Burk曲线「7」（图2）。用米氏公式计算出Km和各自的Km值「8」，将各回归方程的斜率值（h）进行显著性检验（表3）
结论与讨论
铜离子、补骨脂、白灵酊和驱虫斑鸠菊注射液均能提高酪氨酸酶的活性。锶离子、白灵片、白芷、白疾黎、白癜净和生理盐水则无此作用。
表1 药物对酪氨酸酶活性影响表
NO 药物 用量 ml A475nm±SD 酶激活率（%）
铜离子水溶液 0 0.332±0.006
1 （Cucl2 0.2 0.370±0.009 11.11
20ppm) 0.4 0.382±0.002 14.71
0.6 0.397±0.009 19.21
0.8 0.407±0.004 22.22
补骨脂 0 0.416±0.005
2 （相当于原生 0.2 0.489±0.008 17.5
药约50mg/ 0.4 0.526±0.015 26.44
ml) 0.6 0.528±0.017 26.92
0.8 0.530±0.008 27.4
白灵酊 0 0.352±0.001
（与原药为1 0.2 0.353±0.006 0.28
3 ：1体积比） 0.4 0.372±0.011 5.68
0.6 0.426±0.014 21.02
0.8 0.438±0.012 24.43
驱虫斑鸠菊注 0 0.384±0.005
4 射液(相当于 0.2 0.434±0.028 13.02
原生药50mg 0.4 0.548±0.041 42.71
/ml) 0.6 0.630±0.007 64.06
0.8 0.665±0.013 73.18
注：（1）锶离子、白灵片、白芷、白疾黎、白癜净和生理盐水对酪氨酸酶无激活作用，所以未列入此表。
（2）酶激活百分率计算方法：
不加入药物时所测得的A475记为A1，加入药物后所测得的A475记为A2。
酶激活百分率=（A2—A1）/A1*100%
表2 各种药物对酪氨酸酶活性影响的动力学测定结果
药物 多巴（ml） A475±SD 1/多巴（1/ ml）1/ A475 回归方程 Km or K´m
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